可用于iPS細(xì)胞的冷凍保存！

培養(yǎng)細(xì)胞凍存液COS banker系列

　　COS banker是不含血清和牛來(lái)源化合物的安全培養(yǎng)細(xì)胞凍存液。

　　COS banker II是為了保存過(guò)繼免疫淋巴細(xì)胞而開發(fā)的淋巴細(xì)胞凍存液。

◆特點(diǎn)

●　可以冷凍保存iPS細(xì)胞。

●　無(wú)需稀釋使用。

●　復(fù)蘇后的細(xì)胞存活率優(yōu)異。

●　"COS banker"不含動(dòng)物的血清以及其他動(dòng)物源成分。^＊1

●　為了防止其中的DMSO腐蝕PET容器，特意采用玻璃裝瓶。

*1  "COS banker II"含有GMP級(jí)人血清白蛋白的穩(wěn)定劑。

◆實(shí)驗(yàn)步驟

1. 以轉(zhuǎn)速1200 rpm/5 min對(duì)處于對(duì)數(shù)期^*2的細(xì)胞進(jìn)行離心操作，然后收集大約5×10⁵~1×10⁷個(gè)離心后的細(xì)胞。

2. 向細(xì)胞沉淀中添加1mL本產(chǎn)品，進(jìn)行重懸后放進(jìn)凍存管中，在-80°C冷凍保存。

3.  用液氮儲(chǔ)存時(shí)，細(xì)胞請(qǐng)預(yù)先在-80°C下冷凍1天以上。

4. 復(fù)蘇操作請(qǐng)?jiān)?7°C的恒溫水浴鍋中快速進(jìn)行。

*2 凍存的細(xì)胞需位于對(duì)數(shù)期，這點(diǎn)對(duì)于提高復(fù)蘇后的存活率至關(guān)重要。

◆規(guī)格

◆質(zhì)量控制

◆使用例子

◆iPS細(xì)胞

【冷凍保存程序（緩慢凍結(jié)法）】

●　用CTK溶液回收細(xì)胞

●　離心（1000 rpm，5分鐘），除去上清液

●　添加COS banker，重懸細(xì)胞

●　分裝到凍存管中

●　將凍存管放入凍存盒中。

●　置于-80℃的超低溫冰箱中

●　次日將凍存管移至液氮中

圖1 iPS細(xì)胞（Dotcom）的凍存結(jié)果

左：復(fù)蘇后第二天、   右：復(fù)蘇后第六天

◆人淋巴細(xì)胞

圖2 （左圖）不同細(xì)胞凍存液的細(xì)胞存活率比較

添加0.5 mL細(xì)胞（活細(xì)胞濃度 3×10⁶ cells/mL）至凍存管，并儲(chǔ)存在-80°C中。一周/一個(gè)月/兩個(gè)月后復(fù)蘇（在37°C恒溫水槽中孵育90秒，剩余的冷凍細(xì)胞搖晃融解），測(cè)量存活率。

灰：一周后、 藍(lán)：一個(gè)月后、 黑：2個(gè)月后

圖3（右圖）復(fù)蘇后的細(xì)胞增殖情況

復(fù)蘇凍存了一周的淋巴細(xì)胞，將各個(gè)培養(yǎng)基的活細(xì)胞濃度調(diào)至20×10⁴ cells/mL，在水浴鍋中培養(yǎng)。對(duì)第5天及第6天的活細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。