COA-Cl【2-Cl-C.OXT-A】

類VEGF/NGF活性小分子化合物

COA-Cl（2-Cl-C.OXT-A）是具有促進血管生成作用的小分子化合物。此外，它還具有神經保護和營養(yǎng)作用。COA-Cl為水溶性，有望代替VEGF和NGF在再生醫(yī)療中用于促進血管和神經的生成。另外，它還可作為Xeno-free培養(yǎng)基的添加劑進行使用。

參與血管生成相關的因子包括VEGF（血管內皮細胞生長因子）、PDGF（血小板衍生生長因子）、HGF（肝細胞生長因子）、FGF（纖維細胞生長因子）和血管生成素等，但這些因子都是大分子肽，并且暫未具類似效果的穩(wěn)定的小分子肽。

由于血管生成是癌癥生成和轉移所不可少的，所以作為抗癌劑的血管生成抑制劑的研發(fā)備受關注。此外，針對糖尿病和動脈硬化引起的血管阻塞等導致的血流不足，血管生成促進劑的研發(fā)也備受期待。

經驗證，COA-Cl在人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）的培養(yǎng)細胞中具有促進管腔形成的作用。另外，其在雞絨毛尿囊膜和兔角膜的驗證實驗中的也證實具有促進血管生成的作用。

◆特點

●　具有促進血管生成作用。

●　可促進HUVEC（人臍帶靜脈內皮細胞）的血管生成。可促進CAM（雞胚絨毛尿囊膜)實驗中CAM的生成以及兔角膜血管生成。

●　由于不會激活HUVEC細胞中的VEGFR-2、所以可以促進MEK(MAPKK)和ERK1/2(MAPK)的活化（磷酸化）。

◆用途

●　制備血管模型

●　制備疾病模型

●　分析藥劑作用機制

●　激活細胞

……

◆應用實例

儲備液制備：使用生理鹽水溶解至2 mM

使用濃度： 用于HUVEC細胞時，濃度為 10~500 μM

儲存條件：室溫（溶解后，冷藏保存）

◆產品概況

●　外觀：白色~微褐色，結晶性粉末~粉末或結塊

●　溶解性：可溶于水

◆數(shù)據

■ 在血管內皮細胞和成纖維細胞的共培養(yǎng)體系中使用的案例：促進血管生成作用

培養(yǎng)10天后形成的血管管腔面積有所增加。

（數(shù)據提供：香川大學醫(yī)學部 塚本郁子老師）

■ 使用雞絨毛尿囊膜 (CAM)和兔角膜驗證促進血管生成作用的案例

（數(shù)據提供：香川大學醫(yī)學部 塚本郁子老師）

■ 驗證在正常人成纖維細胞中促進VEGF產生和分泌的案例

更換為含±COA-Cl（100 mmol/L）的培養(yǎng)基，在常氧和缺氧（1%）下培養(yǎng)24 h后，使用ELISA試劑盒 對中細胞中、培養(yǎng)基中的VEGF進行定量檢測。

結果顯示，在含有COA-Cl的培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，可以觀察到VEGF的產生和分泌量更高。

（數(shù)據提供：香川大學醫(yī)學部 塚本郁子老師）

■ 神經模型細胞（PC12）中的突出伸長案列（培養(yǎng)96 h）：神經營養(yǎng)作用

（數(shù)據提供：香川大學醫(yī)學部 塚本郁子老師）

■ 神經模型細胞（PC12）中的多巴胺濃度上升

培養(yǎng)3天后，使用HPLC檢測培養(yǎng)基中的多巴胺濃度。

結果顯示，多巴胺的濃度上升。

（數(shù)據提供：香川大學醫(yī)學部 塚本郁子老師）

■ 大鼠神經膠質瘤細胞（C6）的培養(yǎng)案例：細胞保護作用

（A）D-MEM （B）D-MEM＋血清（馬15%＋牛2.5%）（C）D-MEM＋COA-Cl（100 μmol/L）

接種大鼠神經膠質瘤細胞（C6）至24微孔板，第二天分別加入到（A）、（B）、（C）培養(yǎng)基，培養(yǎng)16天（無需更換培養(yǎng)基）第12天時，（A）和（B）中的細胞已死亡，但（C）中沒有任何變化，并且在第14天時將培養(yǎng)基更換為（B）后，細胞開始增殖。

（數(shù)據提供：香川大學醫(yī)學部 塚本郁子老師）

■ 神經模型細胞（PC12）的培養(yǎng)案例：作為血清替代物使用的可能性

接種神經模型細胞（PC12），次日更換D-MEM±血清（馬10%+牛5%），添加COA-Cl（100 μmol/L），24 h后計算細胞數(shù)。

結果顯示，添加COA-Cl時，細胞數(shù)增加。此外，在不含血清的培養(yǎng)基中，添加了COA-Cl的培養(yǎng)基與添加了血清的培養(yǎng)基有著相同程度的細胞增殖。

（數(shù)據提供：香川大學醫(yī)學部 塚本郁子老師）

■ 神經模型細胞（PC12）中的培養(yǎng)案例：對氧化應激的保護作用

接種神經模型細胞（PC12），次日更換培養(yǎng)基，添加COA-CI（10 μmol/L）和過氧化氫（200 μmol/L）。24 h后檢測響應應激釋放的LDH、凋亡相關蛋白以及活性氧。

結果顯示，添加COA-CI時，LDH、凋亡相關蛋白以及活性氧的釋放量有所減少。

（數(shù)據提供：香川大學醫(yī)學部 塚本郁子老師）

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